实验室分光光度计的操作方法 光度计工作原理

【导读】实验室分光光度计是利用分光光度法，通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。不同种类的分光光度计的基本试验方法相似

实验室分光光度计是利用分光光度法，通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。不同种类的分光光度计的基本试验方法相似，都是利用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源。光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，通过测量样品的吸光值，经过计算可以转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。实验室分光光度计的使用方法①首先接通电源，打开电源开关1，指示灯亮，打开比色皿暗箱盖8，预热20分钟。②波长选择旋钮6，选择所需的单色光波长，用灵敏度旋钮2选择所需的灵敏档。③放入比色皿，旋转零位旋钮5调零，将比色皿暗箱盖合上，推进比色皿拉杆3，使参比比色皿处于空白校正位置，使光电管见光，旋转透光率调节旋钮4，使微安表9指针准确处于100%。按上述方法连续几次调整零位和100%位，即可进行测定工作(仪器面板见图5-6)。实验室分光光度计使用和维护中应注意事项①连续使用仪器的时间不应超过2小时，*是间歇0.5小时后，再继续使用。②比色皿每次使用完毕后，要用去离子水洗净并倒置晾干后，存放在比色皿盒内。在日常使用中应注意保护比色皿的透光面，使其不受损坏或产生划痕，以免影响透光率。③仪器不能受潮。在日常使用中，应经常注意单色器上的防潮硅胶(在仪器的底部)是否变色，如硅胶的颜色已变红，应立即取出烘干或更换。④在托运或移动仪器时，应注意小心轻放。

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荧光分光光度计的发展经历了手控式荧光分光光度计，自动记录式荧光分光光度计，计算机控制式荧光分光光度计三个阶段；荧光分光光度计还可分为单光束式荧光分光光度计和双光束式荧光分光光度计两大系列。其他的还有低温激光Sh p ol’skill荧光分光光度计，配有寿命和相分辨测定的荧光分光光度计等。荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定， 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化， 从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm，发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。荧光分光光度计的基本试验方法由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光．在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱；，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。

可见分光光度计（又名可见光度计、分光光度计）是可见光分光光度法是采用新型单片机技术，开发出能够进行定量测量（标准曲线测量，可对物质进行浓度直读）；

OD值直接测量（吸光度、透过率和能量等直读）；动力学测试（测出物质浓度随时间变化OD值的变化）；

光谱扫描（可以对某一种物质进行全波段扫描，分析物质的特征波长，判断实验过程的误差）；

多波长测试（可以对物质同时进行多个波长的测试，分析物质的相关特性）；

还有可以进行DNA蛋白质测试、总磷总氮测试、重金属测试、农药残留测试、食品安全检测、热力发电金属离子测试等等；

紫外/可见分光光度计已通过ISO9001质量体系认证、国内的计量合格认证和英国dB Technology测试中心CE认证。

软件功能强大，如:动力学测试

A*小采样间隔0.5秒，*大运行时间9小时

B可设定延时时间、运行时间、采样时间间隔

CT/A模式转换

D有计算功能

多波长测试

A测试波长点多达32个

B测试样品多个

建立标准曲线、定量测试

A可同时建立8个点的标准曲线

B可做一阶过零、不过零线性回归和二阶、三阶曲线拟合

DNA/Protein测试

A可手动、自动测试，测试波长缺省值为260nm、280nm和320nm，也可修改

B可计算DNA、Protein和Ratio比率

其它功能

A可将测试结果调到Excel或Word里进行数据处理

B氘灯、钨灯的自动开关等其它系列功能。

广泛应用于食品、药品、电力、生物研究、教学科研、化学化工、质量监督、水质环保和商检等各大领域。

可见分光光度计，波长范围320nm-1100nm，能满足不同物质的测试。