紫外分光光度计的选择因素 光度计工作原理

【导读】紫外分光光度计是实验室普及率很高的一种光谱仪器，由于灵敏度高、选择性好、准确度高、适用浓度范围广，而且分析成本低、操作简便、快速得到广泛的应用，长期在

紫外分光光度计是实验室普及率很高的一种光谱仪器，由于灵敏度高、选择性好、准确度高、适用浓度范围广，而且分析成本低、操作简便、快速得到广泛的应用，长期在分析领域扮演很重要的角色。

在选择这类仪器时要考虑哪些因素呢？

1、光学构造（OPTICALCONFIGURATION）

一般来说，紫外光分光光度计分为单光束和双光束两类。顾名思义，单光束型主要是依赖单束光进行测量。一束给定波长的光通过对照物，然后再通过实际样品溶液，就能得到吸光结果。

双光束型则是通过一个斩光轮（mirroredchopperwheel）将一束光分成两束，分别测量对照样品和实际样品。

可以*小化光漂移（lampdrift）和减少测量时间。一些双光型光度计不利用斩光轮，而是利用一种光束分光器来代替，将一束光分成两束平行的光然后同时测量对照样品和目的样品。

因为增加了测量的速度，所以双光束分光光度计在测量一些溶液随时间动态变化的研究中大有用处。

2、光源和检测方法（LIGHTSOURCESANDDETECTION）

分光光度计的光谱也是需要考虑的一个重要因素。实验室研究人员希望省钱购入专门仪器定量核酸、蛋白或者细菌的生长情况。

例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波长下测量样品。果果需要更大的灵活性，研究者可以考虑一种更高性能的宽光谱仪器，可以程序性地进行ELISAs分析和比色分析。

紫外分光光度计一般覆盖190nm和380nm波长，通常利用氘灯照明。一些特殊的仪器可以提供满足光子学和半导体研究需要的光谱范围。

VarianofPaloAlto公司的CaryDeepUV和HitachiHighTechnologiesofTokyo的U-7000AutomatedVacuumUVSystem就是这样的仪器。

一些仪器具有多种光源供选择

紫外光、可见光和甚至红外光（780nm至3,000nm）。钨灯和卤素灯一般只覆盖可见光部分（大约380nm到800nm）。而氙灯则可以覆盖紫外光和可见光区域。

分光光度计的带宽（bandwidth）很大程度上依赖于单色仪的狭缝的宽度。可以投射出实验精确要求的光谱。

一种严格带宽使得仪器能对复杂的混合物进行高分辨率的吸光测量。可变的单色仪的狭缝宽度能使一台分光光度计满足多种实验需要。

为了测量吸光值，分光光度计制造商通常使用光电倍增管（photo-multipliertubes，PMTs）和光敏二极管。

PMTs提供快速的反应时间和良好的灵敏度，并且可以在紫外光谱调节至特定的范围。但一些制造商依赖于光敏二极管的动态范围在数秒内行使所有的光谱测量。

3、样品类型（SAMPLEFORMAT）

在大部分的样品类型中，分光光度计可接受样品孔、小玻璃管cuvette、吸浆管和微孔板。微孔板主要是满足高通量的需要和大规模的实验室需求。

但尽管对于小实验室来说，制造商仍然提供了多种容器转换器来满足通量的要求和减少实验时间。

用小试管cuvette装样品容量一般从1μl-5ml，并且一些仪器装备了各种样品固定物来满足各种改变需要。体现了柔韧性。

4、数据管理（DATAMANAGEMENT）

大部分单机型的分光光度计包含了驱动仪器运行和管理数据的软件。高性能的仪器，通常与PC机一起联用，需要从制造商提供额外的软件。同时用户也可以选择升级软件以满足他们的需要。

另外一个值得考虑的因素是数据的*终使用。各独立实验室都有各自感兴趣的实验结果。

例如一些药物机构需要考虑美国FDA的要求和欧联盟的药物评价机构的要求选择不同的数据处理方式。

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原子荧光光度计工作试验方法 将样品溶液中的待分析元素还原为挥发性共价气态氢化物(或原子蒸汽)，然后借助载气将其导入原子化器，在氩-氢火焰中原子化而形成基态原子。基态原子吸收光源的能量而变成激发态，激发态原子在去活化过程中将吸收的能量以荧光的形式释放出来，此荧光信号的强弱与样品中待测元素的含量成线性关系,因此通过测量荧光强度就可以确定样品中被测元素的含量。 产品特点 高精度原子化器高度自动调节装置 设计的原子化器高度自动调节装置采用人机对话，自动控制原子化器高度调节，更加方便快捷，而且保证了仪器的稳定性，提高了仪器灵敏度。 屏蔽式石英炉原子化器 特制的双层石英炉芯，有效地减少了荧光猝灭的发生，提高了仪器的精密度。 实用型空心阴极灯固定装置

设计的空心阴极灯固定装置，不需要人工调节灯的方向角度，使空心阴极灯的安装固定和更换更加的简单、便捷。而且全遮盖式黑色固定套防止了激发光源的散射。原子荧光光度计技术优点 非色散系统、光程短、能量损失少 结构简单，故障率低 灵敏度高，检出限低，与激发光源强度成正比 接收多条荧光谱线 适合于多元素分析 采用日盲管检测器，降低火焰噪声 线性范围宽，3个量级 原子化效率高，理论上可达到100% 没有基体干扰 可做价态分析 只使用氩气，运行成本低 采用氩氢焰，紫外透射强，背景干扰小 【导读】实验室分光光度计是利用分光光度法，通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。不同种类的分光光度计的基本试验方法相似

实验室分光光度计是利用分光光度法，通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。

不同种类的分光光度计的基本试验方法相似，都是利用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源。光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，通过测量样品的吸光值，经过计算可以转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

实验室分光光度计的使用方法

①首先接通电源，打开电源开关1，指示灯亮，打开比色皿暗箱盖8，预热20分钟。

②波长选择旋钮6，选择所需的单色光波长，用灵敏度旋钮2选择所需的灵敏档。

③放入比色皿，旋转零位旋钮5调零，将比色皿暗箱盖合上，推进比色皿拉杆3，使参比比色皿处于空白校正位置，使光电管见光，旋转透光率调节旋钮4，使微安表9指针准确处于100%。按上述方法连续几次调整零位和100%位，即可进行测定工作。

实验室分光光度计使用和维护中应注意事项

①连续使用仪器的时间不应超过2小时，*好是间歇0.5小时后，再继续使用。

②比色皿每次使用完毕后，要用去离子水洗净并倒置晾干后，存放在比色皿盒内。在日常使用中应注意保护比色皿的透光面，使其不受损坏或产生划痕，以免影响透光率。

③仪器不能受潮。在日常使用中，应经常注意单色器上的防潮硅胶(在仪器的底部)是否变色，如硅胶的颜色已变红，应立即取出烘干或更换。

④在托运或移动仪器时，应注意小心轻放。

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