气相色谱柱的选择方法 色谱柱工作原理

【导读】气相色谱柱的分离效果主要取决于其固定相，柱长度，柱内径，液膜厚度这几个因素，从试验方法上讲，这几个因素相同的柱子，其分离效果是完全一样的。1)柱长度的选择分

气相色谱柱的分离效果主要取决于其固定相，柱长度，柱内径，液膜厚度这几个因素，从试验方法上讲，这几个因素相同的柱子，其分离效果是完全一样的。1)柱长度的选择分辨率与柱长的平方根成正比。在其他条件不变的情况下,为取得加倍的分辨率需有4倍的柱长。较短的柱子适于较简单的样品,尤其是由那些在结构、极性和挥发性上相差较大的组分组成的样品。一般来说15m的短柱用于快速分离较简单的样品，也适于扫描分析；30m的色谱柱是*常用的柱长，大多数分析在此长度的柱子上完成；50m、60m或更长的色谱柱用于分离比较复杂的样品。应该注意，柱长增加分析时间也增加。2)柱内径的选择柱径直接影响柱子的效率、保留特性和样品容量。小口径柱比大口径柱有更高柱效，但柱容量更小。0.25mm具有较高的柱效，柱容量较低。分离复杂样品较好。0.32mm柱效稍低于0.25mm的色谱柱，但柱容量约高60%。0.53mm具有类似于填充柱的柱容量，可用于分流进样，也可用于不分流进样，当柱容量是主要考虑因素时（如痕量分析），选择大口径毛细管柱较为合适。3)液膜厚度的选择液膜厚度影响柱子的保留特性和柱容量。厚度增加，保留也增加。0.1～0.2m薄液膜厚度的毛细管柱比厚液膜的毛细管柱洗脱组分快，所需柱温度低，且高温下柱流失较小，适用高沸点的化合物的分析。0.25～0.5m常用的液膜厚度。厚液膜对分析低沸点的化合物较为有利。4)固定相的选择不同的固定相对不同的分析物的影响不同，根据相似相溶试验方法，性质越相近，固定相对其的流动阻力越大，其保留时间越长．色谱柱就是通过这个试验方法将不同性质的混合物相互分开的。

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　　聚合物基质色谱柱具有相当强的硬度，有无孔和有孔两种规格。该固定相中含有苯基官能团，可与待测物发生疏水相互作用。聚合物基质色谱柱广泛用于各种不同基质中糖分子、糖醇和其他水溶性物质的分离。Carbo-H可以用来分析有机酸及利巴韦林等物质，Carbo-Ca可以用来分离树胶醛糖、阿糖醇等糖类。聚合物基质色谱柱采用聚合物基质填料，色谱柱化学稳定性好，寿命长，分离效果随时间变化小。能用碱性溶液进行清洗再生。适用于蒸发光散射检测器、电雾化检测器以及LC/MS。　　正确的使用聚合物基质色谱柱是极其重要的，并且对液相分析非常有帮助的。接下来的文章是一些使用、清洗和保存液相聚合物基质色谱柱的指导。这些指导根据两方面来分的，一方面是根据聚合物基质色谱柱的基质（硅胶，聚合物或者其他），另一方面是表面键和的化学固定相。　　聚合物基质色谱柱采用纯聚合物基材，因此具有的耐缄性（PH范围2-13），适用于带有芳香环以及不饱和化合物的分离/纯化。 此类柱提供了广范的溶剂的选择，pH范围可丛1-13。聚合物C18从亲水的甲基丙烯酸酯键合C18官能团，利用亲水的聚甲基丙烯酸酯载体键合ODS性能相似于硅胶键合ODS甲基丙烯酸酯在聚合前就用C18官能团化，因此有较大的重现性没有硅醇基和金属杂质，有用的颗粒度为6，10，50μ在pH 1-13间稳定。和所有的标准的反相溶剂都相容。　　聚合物基质色谱柱在pH2~12范围内呈现出较高的化学稳定性，使其可以在碱性条件下被使用。较宽的pH范围还可以使用多碱性化合物在非带电形式下得到分析，减少了二次相互作用发生进而改善分析峰形。由于二次相互作用的降低，聚合物基质色谱柱大大改善了对肽和蛋白质的回收。

色谱柱的安装

　　（1）拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。

　　（2）拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。

　　（3）按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如条件允许，建议在柱前使用保护柱)；柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57mm、内径为0.1-0.3mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止，再用扳手继续顺时针拧1／4-1／2圈，切记不要用力过大。如色谱柱通过流动相加压后有漏液现象，请用扳手继续顺时针拧1／4圈，直至不漏液为止。

色谱柱的储存:

　　1．防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。

　　2．尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴比较好）中，避免在缓冲溶液中保存。

　　3．使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。

　　4．避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。

　　5．将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。